賽默飛NanoDrop One光度計的使用方法相對簡便,以下是詳細(xì)步驟:
一、準(zhǔn)備階段
1.儀器檢查與連接
確保NanoDrop One光度計已正確連接到電源,并打開設(shè)備。
檢查設(shè)備是否已正確連接到計算機(如適用),并確保相關(guān)軟件(如NanoDrop軟件)已安裝并可正常運行。
2.樣品準(zhǔn)備
確保樣品充分混勻,并根據(jù)需要適當(dāng)稀釋。高濃度樣品可能超出儀器的線性檢測范圍,影響結(jié)果準(zhǔn)確性。
使用無絨擦拭紙或?qū)嶒炇覠o塵紙輕輕擦拭測量平臺(光纖)和上臂,確保無灰塵和殘留物,避免影響測量結(jié)果。
二、操作步驟
1.選擇測量模式
在計算機上的NanoDrop軟件中,或直接在儀器的觸摸屏上,選擇需要的測量模式,如核酸(DNA、RNA)模式、蛋白質(zhì)模式或其他特殊分析模式。
2.進行空白檢測
將1~2微升的空白液體(如去離子水或緩沖液,需與樣品溶劑一致)滴在光纖平臺上。
放下上臂,確保液體被夾在上臂和測量平臺之間。
點擊軟件中的“Blank”按鈕或儀器上的相應(yīng)按鈕,進行空白檢測以消除背景吸光度。
3.樣品檢測
用移液器取1~2微升樣品,準(zhǔn)確滴加到光纖平臺的中心位置。
輕輕放下上臂,使樣品處于光纖間的檢測區(qū)域。
點擊軟件中的“Measure”按鈕或儀器上的相應(yīng)按鈕,開始樣品的測量過程。
測量結(jié)果會立即顯示在軟件界面上或儀器的屏幕上,包括吸光度(如A260、A280)和核酸或蛋白質(zhì)的濃度值。如果是核酸測量,還會提供A260/A280和A260/A230的比值,用于評估樣品的純度。
三、結(jié)束與數(shù)據(jù)保存
1.結(jié)束實驗
完成檢測樣品后,點擊結(jié)束實驗按鈕。
2.數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出
NanoDrop軟件通常提供了數(shù)據(jù)保存和導(dǎo)出功能。在測量完成后,用戶可以選擇保存數(shù)據(jù)到電腦中,或?qū)С鰹镋xcel或其他格式的文件,便于后續(xù)分析和記錄。
四、注意事項與維護
1.樣品準(zhǔn)備
樣品應(yīng)充分混勻,避免引入氣泡。
如果樣品濃度過高,應(yīng)先稀釋后再進行測量。
2.平臺清潔
每次測量完成后,都應(yīng)使用無絨擦拭紙或?qū)嶒炇覠o塵紙輕輕擦拭光纖平臺和上臂,確保樣品殘留被清除,避免交叉污染。
如果有殘留難以清除,可以使用70%乙醇或去離子水濕潤擦拭紙進行清潔。
3.設(shè)備校準(zhǔn)
建議定期使用標(biāo)準(zhǔn)溶液進行校準(zhǔn),以確保設(shè)備的測量精度。
4.日常維護
長期使用后,應(yīng)定期對光纖平臺進行清潔,防止樣品殘留物影響讀數(shù)。
遵循廠家提供的維護指南可以延長設(shè)備使用壽命。
遵循以上步驟和注意事項,可以確保賽默飛NanoDrop One光度計的正確使用和有效維護,從而獲得準(zhǔn)確的實驗結(jié)果。